|
|
Vliv mutovaného huntingtinu na oxidativní stres v primárních fibroblastech izolovaných z knock-in miniprasečího modelu pro Huntingtonovu nemoc
Sekáč, Dávid ; Ellederová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Hanzlíková, Hana (oponent)
Huntingtonova chorea je dominantně dědičné onemocnění způsobené expanzí trinukleotidů (Cytosin-Adenin-Guanin) v genu kódujícím protein huntingtin. Nositelé této mutace vykazují příznaky spojené s motorickým poškozením, kognitivní a psychiatrickou poruchou, která se nazývá Huntingtonova nemoc (HD). Hlavním příznakem HD je striatální atrofie ve středním věku života. Protože je známo, že huntingtinový protein se podílí na mnoha buněčných procesech, jako je transkripční regulace a metabolismus, tyto procesy se mění jeho mutací. Jedním ze znaků pozorovaných v HD patogenezi je přítomnost oxidačního stresu. Cílem práce bylo sledovat molekulární změny, které předchází manifestaci HD v miniprasečím knock-in modelu. Jako materiál pro monitorování molekulárních změn vedoucích k tomuto stavu byly použity primární fibroblasty. Jelikož oxidační stres vzniká z nerovnováhy mezi oxidanty a antioxidanty, byla měřena hladina reaktívnich molekul a peroxidace lipidů spolu s expresí genů spojených s antioxidační odezvou. Současně byla sledována exprese genů souvisejících s metabolismem a opravou DNA. Přestože nebyly zjištěny rozdíly v hladině oxidačního stresu nebo v expresi genů antioxidační odezvy, byly pozorovány změny v expresi genů souvisejících s metabolismem a opravou DNA u fibroblastů z knock-in miniprasat ve...
|
|
|
Charakterizace vlivu lidského mutovaného huntingtinu na diferenciaci nervových kmenových buněk.
Budková, Kateřina ; Vodičková, Kateřina (vedoucí práce) ; Romanyuk, Natalyia (oponent)
Huntingtonova choroba (HD) je autozomálně dominantní neurodegenerativní onemocnění způsobené expanzí repetice CAG kodonu v genu huntingtin (HTT). Tato expanze způsobuje změnu biochemických vlastností proteinu huntingtinu (HTT), jeho agregaci a buněčnou toxicitu, což vede k degeneraci neuronů mozku zejména v oblasti striata. Jako modelový systém pro in vitro modelování tohoto onemocnění mohou sloužit indukované pluripotentní buňky odvozené přímo z buněk pacientů s HD. Jelikož k neuronálním dysfunkcím dochází u pacientů s HD již roky před manifestací prvních klinických příznaků, může tento modelový systém pomoci objasnit mechanismy, které předcházejí nástupu onemocnění. Cílem této diplomové práce bylo diferencovat iPSC (odvozené z fibroblastů HD pacientů a zdravých kontrol) do nervových kmenových buněk (NSC) a následně do populací neuronálních buněk a sledovat molekulární změny v jejich diferenciaci spojené s vlivem mutovaného HTT. Proces diferenciace byl sledován na základě vybraných markerů pomocí imunofluorescence, metody western blot a qRT-PCR. Podařilo se nám vytvořit stabilní linie NSC odvozených ze 3 kontrolních a 3 HD iPSC linií. Všech 6 linií NSC bylo schopno dále diferencovat do neuronálních populací. Na transkripční úrovni jsme nalezli vyšší expresi genu ADAM10 v HD NSC liniích a vyšší...
|
|
|
The role of neuroinflammation in neurodegenerative CNS disease processes
Červenák, Karol ; Novotný, Jiří (vedoucí práce) ; Spišská, Veronika (oponent)
Inflamačné procesy v CNS sú dôležitou súčasťou neuroimunity. Môžu byť prospešné a mať neuroprotektívny charakter, ale podľa miery a doby aktivácie môžu mať na funkciu CNS negatívny efekt. Neuroinflamácia sa prejavuje aktiváciou rezidentných buniek imunity, mikroglií a astrocytov, aktiváciou inflamačných signálnych dráh a privolávaním imunitných buniek z krvi a ich penetráciou cez hematoencefalickú bariéru. Chronická neuroinflamácia môže spôsobovať neurodegeneráciu a je kľúčová v patogenéze neurodegeneračných ochorení. Neurodegenerácia je ireverzibilná, ale dá sa spomaliť. Liečby cielené na moduláciu neuroinflamácie predstavujú sľubnú možnosť pre spomalenie a zastavenie neurodegenerácie u ľudí s chorobami ako sú napríklad Alzheimerova, Parkinsonova alebo Huntingtonova choroba. Cieľom tejto práce je zhrnúť informácie o inflamačných procesoch v mozgu a súčasné poznatky o ich role v patogenéze v niektorých neurodegeneračných ochoreniach. Kľúčové slová: Zápal, mikroglie, neurodegenerácia, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, Huntingtonova choroba, CNS
|
|
|
Odpověď na poškození DNA u Huntingtonovy choroby
Vachová, Veronika ; Šolc, Petr (vedoucí práce) ; Roth, Jan (oponent)
Huntingtonova choroba (HD) je autozomálně dominantní neurodegenerativní onemocnění, které vede ke ztrátě striatálních neuronů v bazálních gangliích. HD se projevuje nekoordinovanými pohyby a progresivním narušením kognitivních funkcí. HD je poměrně vzácné onemocnění a vyskytuje se přibližně u 0,01 % západoevropské populace. Je způsobena expanzí CAG repetice v genu pro huntingtin (HTT). Tato mutace vede k prodloužení polyglutaminového řetězce. Během exprese mutantního huntingtinu (mHTT) dochází v buňce k akumulaci dvouřetězcových zlomů (DSB) kvůli snížené schopnosti je opravit, což přispívá k patogenezi HD. Tento mechanismus však není zcela objasněn. Je několik úhlů pohledu, jak mHTT narušuje odpověď na DNA poškození (DDR). Některé studie tvrdí, že při expresi mHTT dochází k nadměrné aktivaci DDR včetně p53 signální dráhy vedoucí k apoptóze. Další výsledky poukazují na neschopnost buňky efektivně dokončit opravu pomocí nehomologního spojování konců (NHEJ) nebo neschopnost buňky tyto DSB dokonce rozeznat. Všechny tyto teorie mohou vysvětlit buněčnou smrt v důsledku vysokého počtu neopravených DNA poškození. Pochopení těchto mechanismů je důležité pro vývoj terapeutických strategií. Klíčová slova: Huntingtonova choroba, huntingtin, dvouřetězcové zlomy DNA, DNA poškození, homologní rekombinace,...
|
|
|
Pathogenesis of Huntington's disease in peripheral tissues
Vachútová, Dominika ; Motlík, Jan (vedoucí práce) ; Fiala, Ondřej (oponent)
Huntingtonova choroba (HD) je neurodegeneratívne autozomálne dominantné dedičné ochorenie s nástupom prejavov až v dospelosti. Ochorenie je spôsobené expanziou CAG repetícií v géne pre proteín huntingtin, ktorý je exprimovaný vo väčšine tkanív. HD je charakteristická predovšetkým odumieraním buniek bazálnych ganglií a mozgovej kôry, ale poškodenie huntingtinu má závažný dopad aj na periférne tkanivá. Boli zistené závažné srdečné dysfunkcie, strata váhy, narušenie energetického metabolizmu, pozmenená glukózová homeostáza, atrofia svalstva a veľa ďalších. Mechanizmy týchto zmien nie sú stále dostatočne popísané a ani neexistuje adekvátna liečba. Kľúčové slová: Huntingtonova choroba, mutovaný huntingtin, CAG opakovanie, periférne tkanivo
|
|
|
Role ergoterapeuta v léčbě pacientů s Huntingtonovou chorobou
Sýkorová, Jitka ; Čábelková, Alžběta (vedoucí práce) ; Dlouhá Maršálková, Alexandra (oponent)
BAKALÁŘSKÉ PRÁCE Název: Role ergoterapeuta v léčbě pacientů s Huntingtonovou chorobou Autor: Jitka Sýkorová Vedoucí práce: Bc. Alžběta Čábelková Abstrakt bakalářské práce: Tato práce se zabývá možnostmi využití ergoterapie u pacientů s Huntingtonovou chorobou, neurodegenerativním onemocněním mozku. Huntingtonova choroba (HCH) je v současné době nevyléčitelné onemocnění, průběh nemoci lze však zmírnit různými terapeutickými metodami. Své místo zde má také včasná ergoterapeutická intervence a role ergoterapeuta v interprofesním týmu zabývajícím se léčbou těchto pacientů je nezastupitelná. V České republice jsou však zkušenosti s ergoterapií u pacientů s HCH minimální. Bakalářská práce obsahuje část teoretickou a praktickou. Teoretická část poskytuje základní informace o HCH, jejím vzniku, formách i klinickém obrazu. S využitím zahraničních odborných zdrojů se teoretická část věnuje také možnostem a cílům ergoterapie u pacientů s HCH. V rámci praktické části byly vyhodnoceny dotazníky distribuované mezi pacienty a pečující, jež mj. poskytly orientační přehled problémových oblastí pacientů. Během ergoterapeutického vyšetření pacientů s HCH byly využity Montrealský kognitivní test a Kanadské hodnocení výkonu zaměstnávání, které jsou významné a přínosné pro stanovení priorit a cílů terapie. Přílohy...
|
|
|
Huntington's disease modeling and stem cell therapy in spinal cord disorders and injury
Hruška-Plocháň, Marián ; Motlík, Jan (vedoucí práce) ; Bjarkam, Carsten (oponent) ; Roth, Jan (oponent)
Neurologické poruchy postihují více než 14 % světové populace a společně s traumatickým poškozením mozku a míchy představují významnou zdravotní a socioekonomickou zátěž. Výskyt dědičných a idiopatických neurodegenerativních poruch a akutních poškození CNS navíc zaznamenává globální nárůst a neurovědecká komunita je proto stavěna před množství nezodpovězených otázek. To je důvodem, proč lze pokládat výzkum poruch CNS za klíčový. Vzhledem k tomu, že zvířecí modely nemocí a traumatických poškození CNS mají nepostradatelnou úlohu v projekci výsledků základního výzkumu do klinické praxe, tato práce je zaměřena na vytvoření nových zvířecích modelů a jejich využití v preklinickém výzkumu. Vytvořili a charakterizovali jsme transgenní model miniaturního prasete pro Huntingtonovu chorobu, jenž je doposud jediným prasečím modelem a představuje velice hodnotný subjekt pro dlouhodobé testování bezpečnosti léčby. Dále jsme zkřížili již charakterizovaný myší model Huntingtonovy choroby s myším modelem gad postrádajícím expresi UCHL1 s výsledky, které potvrzují teorii o "ochranné" funkci agregátů mutovaného huntingtinu a vedou k předpokladu, že funkce UCHL1 v ubiquitin proteazomového systému mohou být v Huntingtonově chorobě narušené. Traumatické poškození a amyotrofická laterální skleróza (ALS) jsou dvěma...
|
|
|
Monitorování vývoje onemocnění Huntingtonovy choroby u transgenních miniprasat s N-terminální částí lidského mutovaného huntingtinu: biochemické a motorické změny u F0, F1 a F2 generace
Kučerová, Šárka ; Ellederová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Klempíř, Jiří (oponent)
Huntingtonova choroba (HD) patří mezi neurodegenerativní onemocnění, od kterých se liší příčinou (expanze trinukleotidové repetice CAG v exonu 1 genu kódující protein huntingtin (Htt)) pouze v jednom genu (tzv. monogenní onemocnění). Ačkoliv je již od roku 1993 známá příčina nemoci, dosud není zcela známa patofyziologie HD a není nalezen lék. Pro lepší porozumění nemoci a pro možné preklinické testování se používají modely HD. Mezi nejčastěji používané modely patří hlodavci, hlavně myši, ale bylo důležité vytvořit i větší zvířecí modely, které by byly více podobné člověku. Proto bylo v roce 2009 vytvořeno na Akademii věd v Liběchově transgenní (TgHD) miniprase pomocí mikroinjikace lentivirového vektoru nesoucí N-terminální část lidského mutovaného HTT (mtHTT) s 124 CAG repeticemi v exonu 1. Tento model je životaschopný a v každé generaci se rodí určitá část Tg zvířat. V této práci jsem se věnovala biochemickým i behaviorálním změnám u tohoto modelu. Srovnávala jsem kontrolní (Wt) a transgenní (Tg) sourozence. Zjistila jsem, že biochemické změny se projevují hlavně zvýšenou přítomností fragmentů Htt ve varlatech a v mozku. V behaviorální části bylo mým hlavním úkolem zavedení metodiky pro další zkoumání behaviorálních změn u tohoto modelu, které zatím nebyly popsány. Byla testována zvířata F0, F1 a...
|
|
|
Vzájemný vztah mutovaného huntingtinu a pre-rakovinového stadia u savčích buněk.
Butalová, Nikola ; Baxa, Monika (vedoucí práce) ; Koudelková, Lenka (oponent)
Huntingtonova choroba je závažné dědičné onemocnění, které způsobuje odumírání nervových buněk. Nemoc postihuje jedince okolo 40. roku života. Projevuje se mimovolními pohyby končetin a progresivní demencí. Toto onemocnění je v současné době neléčitelné a vždy končí smrtí, která nastává do 15 let od projevů prvních příznaků. Na konci 20. století byl pozorován zvláštní vztah mezi Huntingtonovou chorobou a maligní neoplazií, který poukazuje na nižší výskyt rakoviny mezi pacienty s tímto neurodegenerativní onemocněním oproti běžné populaci. Za ochranný účinek proti vývoji rakoviny u těchto osob je pravděpodobně zodpovědná expandovaná sekvence CAG úseku. Pro kvalitní studium této choroby bylo velmi důležité vytvoření vhodného experimentálního modelu, který bude svými vlastnostmi nejvíce podobný člověku. Tímto modelem by mohlo být transgenní miniprase nesoucí lidský mutovaný protein huntingtin - tgHD prase. Pro studium rakoviny byl také vytvořen model miniprasete vykazující dědičný výskyt maligních kožních lézí - MeLiM prase. Tyto dvě specifické linie miniprasat byly zkříženy a narodila se selata jak s melanomem, tak i transgenní s mutovaným huntingtinem, ale také selata, která byla současně transgenní a měla melanom. Navíc ve stejném vrhu byla i zvířata netransgenní a bez melanomů, která mohou sloužit...
|
|
|
Testicular Degeneration of Transgenic Porcine Model of Huntington's Disease
Skřivánková, Monika ; Motlík, Jan (vedoucí práce) ; Roth, Jan (oponent) ; Petr, Jaroslav (oponent)
Huntingtonova choroba je autozomálně dominantní neurodegenerativní onemocnění způsobené prodlouženou (≥36) CAG repeticí v genu pro huntingtin. Jejím charakteristickým znakem je atrofie mozku, ale huntingtin je široce deponován ve všech tkáních těla, nejvíce v mozku a varlatech. Jeho patogenní účinek je podmíněn tvorbou cytotoxických forem agregátů a fragmentů, které se vyskytují jak v mozku, tak v periferních tkáních. Atrofie varlat byla prokázána v posmrtných vzorcích lidských pacientů s Huntingtonovou chorobou a u transgenních myších modelů. Zkoumali jsme pokles reprodukčních schopností u velkého zvířecího modelu Huntingtonovy choroby. Transgenní model (tgHD) miniprasete byl vytvořen vložením lentivirového vektoru do genómu prasete. Ten obsahoval zkrácenou formu N terminální části lidského mutovaného huntingtinu. Kanci této transgenní linie vykazovali od 13 měsíců věku sníženou schopnost plodit potomstvo. Potvrdili jsme apoptózu buněk spermagenní linie a Sertoliho buněk a výskyt morfologicky poškozených spermií, které nebyly schopny účinně oplodnit oocyt v podmínkách in vitro. U spermií tgHD kanců jsme zjistili snížení parametrů mitochondriálního metabolismu. Tyto změny nebyly závislé na věku kanců, přímo souvisí s výskytem mutovaného huntingtinu ve varlatech a spermiích transgenních kanců, což...
|
host ::
RSS.